一種檢測(cè)絕對(duì)端粒長(zhǎng)度的PCR方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201910312065.2 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN109943626A 公開(kāi)（公告）日 2019-06-28
申請(qǐng)公布號(hào) CN109943626A 申請(qǐng)公布日 2019-06-28
分類號(hào) C12Q1/6851 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 白玉杰;林思妮;孫海星;張艷;張曉娟;王建輝;董紅宇;吳東穎 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 山東荊衛(wèi)生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 261000 山東省濰坊市峽山區(qū)怡峽街197號(hào)生命科學(xué)園D棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種檢測(cè)絕對(duì)端粒長(zhǎng)度（absolute telomere length）的PCR方法，能方便準(zhǔn)確地檢測(cè)人端粒的絕對(duì)長(zhǎng)度，屬于分子生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域。本發(fā)明采用基因合成的方法，分別合成端粒和單拷貝基因36B4的寡核苷酸序列，并連接到質(zhì)粒載體上構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品，使用大腸桿菌體外擴(kuò)增質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，提取質(zhì)粒DNA，測(cè)量濃度，計(jì)算拷貝數(shù)及端粒總長(zhǎng)度。確定標(biāo)準(zhǔn)品起始量，進(jìn)行梯度稀釋，采用熒光定量PCR法（Q?PCR法）分別得到端粒及36B4的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)樣本DNA的端?？傞L(zhǎng)度以及36B4的拷貝數(shù)絕對(duì)定量，從而計(jì)算待測(cè)樣本DNA的平均絕對(duì)端粒長(zhǎng)度。采用絕對(duì)端粒長(zhǎng)度PCR法檢測(cè)端粒長(zhǎng)度，具有成本低、周期短、準(zhǔn)確度高的優(yōu)點(diǎn)，適合高通量檢測(cè)，易于臨床推廣使用，實(shí)用性較強(qiáng)。