一種應(yīng)用于黑水虻的CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)的標(biāo)記基因

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910534976.X 申請日 -
公開（公告）號 CN112111526A 公開（公告）日 2020-12-22
申請公布號 CN112111526A 申請公布日 2020-12-22
分類號 C12N15/90;C12N9/22;C12N15/89;C12N15/113;C12N15/11;A01K67/027 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 黃勇平;詹帥;王四寶;寇宗慶;許軍 申請（專利權(quán)）人 江蘇綠博低碳科技股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海恒慧知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（特殊普通合伙） 代理人 陳傳喜
地址 200032 上海市徐匯區(qū)楓林路300號4號樓
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種篩選CRISPR/Cas9基因編輯黑水虻的方法，其包括以下步驟：（1）將white基因敲除的模板引物sgRNA1?F和sgRNA2?F分別和通用的反向引物進(jìn)行PCR，將PCR產(chǎn)物回收純化，即得模板sgRNA；（2）將所述的sgRNA模板進(jìn)行體外大量擴(kuò)增，獲得單鏈狀態(tài)的sgRNA；（3）將所述的單鏈狀態(tài)的sgRNA和cas9蛋白混合，顯微注射入黑水虻新產(chǎn)受精卵中；（4）將所述注射后的卵黑暗處理，直到孵化，觀察孵化出的黑水虻的眼色表型，挑出眼睛白化個(gè)體。本發(fā)明用基因編輯技術(shù)實(shí)現(xiàn)了眼色相關(guān)基因的成功敲除，獲得的基因突變黑水虻可以通過觀察是否出現(xiàn)白化眼睛來判斷，表型早期易觀察，作為標(biāo)記基因具有優(yōu)良效果，可以為后續(xù)黑水虻基因功能研究提供便捷。