一種獲取ADAR蛋白細胞內(nèi)高效結合的底物序列的方法及底物序列和應用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010158889.1 申請日 -
公開（公告）號 CN111593093A 公開（公告）日 2020-08-28
申請公布號 CN111593093A 申請公布日 2020-08-28
分類號 C12Q1/6809(2018.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張銳;楊文兵;宋玉龍 申請（專利權）人 時夕（廣州）生物科技有限公司
代理機構 廣州粵高專利商標代理有限公司 代理人 中山大學
地址 510275廣東省廣州市海珠區(qū)新港西路135號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種獲取ADAR蛋白細胞內(nèi)高效結合的底物序列的方法及底物序列和應用。所述方法包括如下步驟：S1.細胞準備及蛋白與RNA交聯(lián)反應；S2.免疫共沉淀及雙鏈RNA消化，連接，和逆轉錄；S3.cDNA環(huán)化、建庫和高通量測序；S4.ADAR底物拼裝；S5.高效結合底物的評估。本發(fā)明首次開發(fā)了一種獲取ADAR蛋白細胞內(nèi)高效結合的底物序列的方法irCLASH，本發(fā)明從實驗及生物信息學的角度填補現(xiàn)有ADAR1結合底物研究存在的空缺，與現(xiàn)有其他研究蛋白與RNA相互作用的方法相比，可顯著提高嵌合體讀長的得率，可最大限度提高了ADAR蛋白作用底物的構建數(shù)量，同時縮短實驗耗時、簡化了實驗操作。??