一種獲取ADAR蛋白細(xì)胞內(nèi)高效結(jié)合的底物序列的方法及底物序列和應(yīng)用
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN202010158889.1 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN111593093B | 公開(kāi)（公告）日 | 2022-03-04 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN111593093B | 申請(qǐng)公布日 | 2022-03-04 |
| 分類號(hào) | C12Q1/6809（2018.01）I | 分類 | 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程; |
| 發(fā)明人 | 張銳;楊文兵;宋玉龍 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 | 時(shí)夕（廣州）生物科技有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 | 代理人 | 趙崇楊 |
| 地址 | 510700 廣東省廣州市黃埔區(qū)廣州國(guó)際生物島星漢二路31號(hào)自編3棟4層04、05、06單元（僅限辦公） | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種獲取ADAR蛋白細(xì)胞內(nèi)高效結(jié)合的底物序列的方法及底物序列和應(yīng)用。所述方法包括如下步驟：S1.細(xì)胞準(zhǔn)備及蛋白與RNA交聯(lián)反應(yīng)；S2.免疫共沉淀及雙鏈RNA消化，連接，和逆轉(zhuǎn)錄；S3.cDNA環(huán)化、建庫(kù)和高通量測(cè)序；S4.ADAR底物拼裝；S5.高效結(jié)合底物的評(píng)估。本發(fā)明首次開(kāi)發(fā)了一種獲取ADAR蛋白細(xì)胞內(nèi)高效結(jié)合的底物序列的方法irCLASH，本發(fā)明從實(shí)驗(yàn)及生物信息學(xué)的角度填補(bǔ)現(xiàn)有ADAR1結(jié)合底物研究存在的空缺，與現(xiàn)有其他研究蛋白與RNA相互作用的方法相比，可顯著提高嵌合體讀長(zhǎng)的得率，可最大限度提高了ADAR蛋白作用底物的構(gòu)建數(shù)量，同時(shí)縮短實(shí)驗(yàn)耗時(shí)、簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。 |
