突變基因的定量檢測方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201610353070.4 申請日 -
公開（公告）號 CN107435061B 公開（公告）日 2022-01-18
申請公布號 CN107435061B 申請公布日 2022-01-18
分類號 C12Q1/6869（2018.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 黃新華;戴慧清 申請（專利權(quán)）人 金弗康生物科技（上海）股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海市匯業(yè)律師事務(wù)所 代理人 陸紅杰
地址 201114 上海市閔行區(qū)恒南路1358號5幢1010室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種突變基因的定量檢測方法，步驟包括：1）提取樣本DNA；2）單鏈合成反應(yīng)；3）微球捕獲純化；4）微球上的3’端保護(hù)性外切純化反應(yīng)；5）以步驟4）的產(chǎn)物為模板進(jìn)行微球上的單鏈合成反應(yīng)，分離去除微球；6）3’端保護(hù)性外切純化反應(yīng)；7）雙端接頭橋媒連接反應(yīng)，并純化；8）以前次純化產(chǎn)物為模板，反復(fù)進(jìn)行單鏈合成反應(yīng)和3’端保護(hù)性外切純化反應(yīng)；9）定量，測序，判斷突變基因。該方法以靶標(biāo)基因片段為模板進(jìn)行反復(fù)多循環(huán)單鏈合成反應(yīng)，將原始模板上系列位點的堿基轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)序列，使靶標(biāo)基因序列最大保真地轉(zhuǎn)化合成，經(jīng)多級單鏈合成后，獲得測序所需的足量完整待測序列，如此提高了低比例突變基因的檢測靈敏度和保真度。