突變基因的定量檢測(cè)方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201610353070.4 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN107435061A 公開(kāi)（公告）日 2017-12-05
申請(qǐng)公布號(hào) CN107435061A 申請(qǐng)公布日 2017-12-05
分類號(hào) C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 黃新華;戴慧清 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 金弗康生物科技（上海）股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 丁紀(jì)鐵
地址 201114 上海市閔行區(qū)恒南路1358號(hào)5幢1010室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種突變基因的定量檢測(cè)方法，步驟包括：1)提取樣本DNA；2)單鏈合成反應(yīng)；3)微球捕獲純化；4)微球上的3’端保護(hù)性外切純化反應(yīng)；5)以步驟4)的產(chǎn)物為模板進(jìn)行微球上的單鏈合成反應(yīng)，分離去除微球；6)3’端保護(hù)性外切純化反應(yīng)；7)雙端接頭橋媒連接反應(yīng)，并純化；8)以前次純化產(chǎn)物為模板，反復(fù)進(jìn)行單鏈合成反應(yīng)和3’端保護(hù)性外切純化反應(yīng)；9)定量，測(cè)序，判斷突變基因。該方法以靶標(biāo)基因片段為模板進(jìn)行反復(fù)多循環(huán)單鏈合成反應(yīng)，將原始模板上系列位點(diǎn)的堿基轉(zhuǎn)化為互補(bǔ)序列，使靶標(biāo)基因序列最大保真地轉(zhuǎn)化合成，經(jīng)多級(jí)單鏈合成后，獲得測(cè)序所需的足量完整待測(cè)序列，如此提高了低比例突變基因的檢測(cè)靈敏度和保真度。