一種重組表達活性谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶及其解脂耶氏酵母菌株的構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811647904.8 申請日 -
公開（公告）號 CN109609531A 公開（公告）日 2019-04-12
申請公布號 CN109609531A 申請公布日 2019-04-12
分類號 C12N15/62;C12N15/81;C12N9/10;C12N1/19;C12R1/645 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 史百鳴;王運龍;盧雪峰;李國瑩;陸瑞琪 申請（專利權(quán)）人 江蘇一鳴生物股份有限公司
代理機構(gòu) 蘇州國卓知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 明志會
地址 225432 江蘇省泰州市泰興市根思一鳴路
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及生物技術領域，尤其是一種重組表達活性谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的制備方法，包括以下步驟；步驟一、在pinA1297質(zhì)粒上插入胰蛋白酶序列和谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶酶原序列；步驟二、將步驟一獲得的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化解脂耶氏酵母菌株Yarrowia lipolytica polh中；步驟三、將步驟二獲得的菌株在YPD培養(yǎng)基中培養(yǎng)、在PPB培養(yǎng)基中發(fā)酵，獲得谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶；步驟四、將獲取的胰蛋白酶和谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶酶原分別表達并分泌到細胞外，在胞外蛋白酶切除谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶酶原的酶原區(qū)，獲得有活性的谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，本發(fā)明發(fā)酵中不需誘導或添加抗生素，能用于食品和藥品的生產(chǎn)，易于培養(yǎng)，發(fā)酵方法簡單，周期短，重組表達谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，不用體外活化，簡化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)工藝，降低生產(chǎn)成本。