PD?1敲除EGFRvIIICAR?T細(xì)胞的制備

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201710538905.8 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN107338224A 公開（公告）日 2017-11-10
申請(qǐng)公布號(hào) CN107338224A 申請(qǐng)公布日 2017-11-10
分類號(hào) C12N5/10;C12N15/90 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 胡邊;唐珂 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 成都克里斯博生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京迎碩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 張群峰;錢揚(yáng)保
地址 610041 四川省成都市高新區(qū)益州大道北段388號(hào)8棟17層1711號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 PD?1敲除EGFRvIIICAR?T細(xì)胞的制備，包括將EGFRvIIICAR質(zhì)粒及其轉(zhuǎn)座酶質(zhì)粒、用于敲除PD?1基因的sgRNA質(zhì)粒及CAS9質(zhì)粒與電轉(zhuǎn)試劑混合，加入PBMC細(xì)胞中進(jìn)行電轉(zhuǎn)染；采用偶聯(lián)CD3或CD3+CD28抗體的磁珠富集CD3陽性T細(xì)胞；以及篩選并培養(yǎng)擴(kuò)增轉(zhuǎn)染后的T細(xì)胞以獲得PD?1敲除EGFRvIIICAR?T細(xì)胞。本發(fā)明選用PiggyBac轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)提高了轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)基因的表達(dá)效率和時(shí)間，簡(jiǎn)化CART的制備程序，增強(qiáng)了系統(tǒng)的負(fù)載量。另外，本發(fā)明敲除PD?1基因時(shí)避免了使用病毒載體，安全性更高。