一種表達(dá)shRNA的AAV輔助包裝載體、構(gòu)建篩選方法和應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201910443566.4 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN110184297A 公開（公告）日 2019-08-30
申請(qǐng)公布號(hào) CN110184297A 申請(qǐng)公布日 2019-08-30
分類號(hào) C12N15/861;C12N15/66;C12N7/00 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李華鵬 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 廣州派真生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 廣州勝沃園專利代理有限公司 代理人 廣州派真生物技術(shù)有限公司
地址 510000 廣東省廣州市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城攬?jiān)侣?號(hào)廣州國(guó)際企業(yè)孵化器G區(qū)304房
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種表達(dá)shRNA的AAV輔助包裝載體及該載體的構(gòu)建方法、篩選方法和應(yīng)用；所述載體基于Rep2與CapDJ輔助包裝載體，在CMV啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)下的miR33?5’UTR和miR33?3’UTR之間插入克隆shRNA的位點(diǎn)2×BsmBI，shRNA表達(dá)小片段連接入所述骨架載體的2xBsmBI位點(diǎn)。所述載體的構(gòu)建方法包括：制備克隆用骨架；制備shRNA表達(dá)小片段；將shRNA表達(dá)小片段連接至克隆用骨架載體上。所述篩選方法包括：用所述載體轉(zhuǎn)化Stbl3感受態(tài)細(xì)菌，質(zhì)粒提??；將提取的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；滴度比較篩選。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)提高AAV生產(chǎn)效率約60％以上。