純化丙酮酸激酶的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201010532789.7 申請日 -
公開（公告）號 CN102010854A 公開（公告）日 2011-04-13
申請公布號 CN102010854A 申請公布日 2011-04-13
分類號 C12N9/12 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 不公告發(fā)明人 申請（專利權(quán)）人 北京利德曼生化股份有限公司研發(fā)中心
代理機(jī)構(gòu) 北京銀龍知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 鐘晶
地址 100176 北京市大興區(qū)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)興海路5號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供一種純化診斷用丙酮酸激酶的方法，其包括如下步驟：(1)將發(fā)酵液調(diào)節(jié)pH、勻漿，(2)穩(wěn)定化處理，(3)熱冷處理，(4)加酸堿處理，(5)用PEG(聚乙二醇)沉淀法將酶從含有雜離子的酶中沉淀出來，將沉淀重懸，繼續(xù)用PEG沉淀法洗去其中殘余的雜離子，(6)酶沉淀經(jīng)重懸，加入單寧酸使殘留的部分PEG和單寧酸結(jié)合生成沉淀并離心除去，上清經(jīng)冷凍升華干燥獲得符合試劑盒純度要求的診斷酶。該方法簡單易行，可以很方便地從含有鈉、鉀、氨等離子和雜蛋白的發(fā)酵粗酶液中將酶提純出來，獲得符合診斷原料要求的酶。該方法酶的得率高，雜離子水平可控制，無需上柱脫鹽，無需透析，易于擴(kuò)大生產(chǎn)。