敲除衣藻內(nèi)源基因和表達外源基因的載體構(gòu)建方法及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710139301.6 申請日 -
公開（公告）號 CN106978432A 公開（公告）日 2017-07-25
申請公布號 CN106978432A 申請公布日 2017-07-25
分類號 C12N15/79;C12N15/66;C12N1/13;C12R1/89 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 黃開耀;鄧璇;王宇蕾 申請（專利權(quán)）人 武漢凈宇微藻科技有限公司
代理機構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 中國科學(xué)院水生生物研究所;武漢凈宇微藻科技有限公司
地址 430000 湖北省武漢市東湖南路7號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種敲除衣藻內(nèi)源基因和表達外源基因的載體構(gòu)建方法及應(yīng)用，該載體包含一個潮霉素抗性標記基因，標記基因兩端都有一個來自RubisCO基因的splicing?donor序列(TCCATTTGCAG/GATGTTCGA)，三個串聯(lián)重復(fù)的終止密碼子，以及一個轉(zhuǎn)錄終止子。該載體用Spel?Ⅰ和Cla?Ⅰ雙酶切后產(chǎn)生的1.9kb片段電擊轉(zhuǎn)化萊茵衣藻細胞，即使載體插入衣藻基因內(nèi)含子中插入載體也成為mRNA一部分，基因轉(zhuǎn)錄在三個串聯(lián)重復(fù)終止密碼子和轉(zhuǎn)錄終止子處停止。與沒有SIS的2.6kb?AphVⅢ插入載體相比，新構(gòu)建的載體提高了突變體轉(zhuǎn)錄終止效率。