一種利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞定點(diǎn)敲入外源基因的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201911233881.0 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN110951693A 公開（公告）日 2020-04-03
申請(qǐng)公布號(hào) CN110951693A 申請(qǐng)公布日 2020-04-03
分類號(hào) C12N5/10(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 崔俊生;王本旭;劉樹濤 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 北京興元和濟(jì)生命醫(yī)學(xué)科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京方安思達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 北京興元和濟(jì)生命醫(yī)學(xué)科技有限公司
地址 102300北京市門頭溝區(qū)美安路7號(hào)德山大廈5層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種利用CRISPR?Cas9系統(tǒng)對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞定點(diǎn)敲入外源基因的方法。所述方法包括以下步驟：1)構(gòu)建包含外源基因的載體質(zhì)粒，并且針對(duì)人的AAVS1位點(diǎn)設(shè)計(jì)構(gòu)建AAVS1sgRNA/Cas9質(zhì)粒；2)將包含外源基因的載體質(zhì)粒和AAVS1sgRNA/Cas9質(zhì)?；旌?，將混合物轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞，將外源基因定點(diǎn)敲入間充質(zhì)干細(xì)胞基因的AAVS1位點(diǎn)。本發(fā)明根據(jù)人的IL1R1、IL1R2、IL1Ra、TNFR1、TNFR2基因，構(gòu)建基于CRISPR?Cas9系統(tǒng)的同源重組質(zhì)粒，然后將攜帶CRISPR?Cas9質(zhì)粒，將含外源基因的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞，從而獲得能夠分泌表達(dá)外源基因所對(duì)應(yīng)蛋白的間充質(zhì)干細(xì)胞。獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞持續(xù)表達(dá)上述蛋白，抑制體內(nèi)IL?1β或TNF?α與其受體結(jié)合，從而抑制體內(nèi)炎癥進(jìn)行，緩解或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎。??