人蛋白基因Notch3胞內(nèi)片段克隆載體及其制備方法和應用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810371944.8 申請日 -
公開（公告）號 CN108546707A 公開（公告）日 2018-09-18
申請公布號 CN108546707A 申請公布日 2018-09-18
分類號 C12N15/70;C12N15/66;C07K14/705 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 梁健嘉;聶秋苗;唐巧燕;何新柳;劉丕瓊;陳春裕 申請（專利權）人 南寧維爾凱生物科技有限公司
代理機構(gòu) 廣西南寧公平知識產(chǎn)權代理有限公司 代理人 南寧維爾凱生物科技有限公司
地址 530000 廣西壯族自治區(qū)南寧市江南區(qū)國凱大道19號A棟319號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種人蛋白基因Notch3胞內(nèi)片段克隆載體，在pcDNA3.1載體的KpnI和XbaI酶切位點之間構(gòu)建有人蛋白基因Notch3胞內(nèi)片段序列。據(jù)此，還建立了相應構(gòu)建方法。實驗結(jié)果顯示，使用該測序驗證后的過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細胞經(jīng)qPCR檢測和蛋白質(zhì)免疫印跡檢測，均可在細胞中特異性高表達N3ICD的mRNA及蛋白，測定結(jié)果清晰準確，價格低廉，大幅縮減實驗成本。因此，本發(fā)明構(gòu)建的N3ICD過表達載體可以作為現(xiàn)成的亞克隆模板，參與到過表達載體構(gòu)建和過表達慢病毒包裝中，為心肌系統(tǒng)疾病的研究帶來巨大便利。本發(fā)明有效解決了人源N3ICD片段克隆困難和在細胞系中高表達的問題，為Notch3基因通路研究提供了實驗基礎。