一種高產(chǎn)核酸片段的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110396644.7 申請日 -
公開（公告）號 CN112921030A 公開（公告）日 2021-06-08
申請公布號 CN112921030A 申請公布日 2021-06-08
分類號 C12N15/10;C12N15/63 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張永正;馬詩敏;張征立;李洋;康濤 申請（專利權(quán)）人 江蘇耀海生物制藥有限公司
代理機(jī)構(gòu) 深圳龍圖騰專利代理有限公司 代理人 姜書新
地址 225300 江蘇省泰州市醫(yī)藥高新區(qū)健康大道801號27幢（藥城）
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明適用于生物技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種高產(chǎn)核酸片段的制備方法，該制備方法包括以下步驟：在目標(biāo)基因序列的5′和3′端分別引入同一個限制性內(nèi)切酶的識別位點，以便經(jīng)單一酶切獲取目的基因片段，并保證片段的均一性；利用酶切、連接方式將目的基因片段與載體骨架連接成一種含有至少2Copy的目的基因片段的重組質(zhì)粒。擴(kuò)增并收集重組質(zhì)粒，利用單一限制性內(nèi)切酶酶切重組質(zhì)粒，得到酶切液；將酶切液利用AKTA經(jīng)陰離子交換樹脂分離純化，獲得目的基因片段。該方法實現(xiàn)了單一批次目的基因片段的高產(chǎn)出，降低了發(fā)酵及純化的規(guī)模和批次量，縮短了生產(chǎn)周期，提高了設(shè)備利用率，增加了經(jīng)濟(jì)效益。