重組人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011607271.5 申請日 -
公開（公告）號 CN112625116A 公開（公告）日 2021-04-09
申請公布號 CN112625116A 申請公布日 2021-04-09
分類號 C07K14/62;C12P21/06 分類 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 聶洪霞;劉海峰;黃菁;許波;呂曉林;張金迪;解福生;郝向慧 申請（專利權(quán)）人 華潤昂德生物藥業(yè)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京思元知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 余光軍;霍雪梅
地址 252201 山東省聊城市東阿縣阿膠街78號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了重組人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換方法，包括：(1)將初步純化的重組人胰島素前體溶液加入緩沖液進(jìn)行濃度和pH值的調(diào)整得到酶切反應(yīng)底物混合液；(2)向酶切反應(yīng)底物混合液中加入重組賴氨酰肽內(nèi)切酶進(jìn)行重組人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換反應(yīng)。本發(fā)明選擇重組賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶作為工具酶，與常用的重組胰蛋白酶相比，單位前體蛋白所需的酶更少，酶切位點(diǎn)單一，酶切過程更高效，使人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換效率達(dá)到95％以上；在放大酶切時(shí)，沒有過酶切的顧慮且酶切后獲得的目的蛋白純度更高；重組賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶酶切最適pH范圍離酶切前后蛋白的pI更遠(yuǎn)，有利于目的蛋白的穩(wěn)定且對酶切環(huán)境中的鹽濃度耐受范圍更大。