基于CRISPR-Cas12a的胸膜肺炎放線桿菌快速可視化檢測方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011643292.2 申請日 -
公開（公告）號 CN114686608A 公開（公告）日 2022-07-01
申請公布號 CN114686608A 申請公布日 2022-07-01
分類號 C12Q1/689（2018.01）I;C12Q1/6844（2018.01）I;C12Q1/04（2006.01）I;C12N15/11（2006.01）I;C12R1/01（2006.01）N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李剛;劉思國;王春來;張躍靈;張萬江 申請（專利權(quán)）人 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所（中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心哈爾濱分中心）
代理機構(gòu) 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 代理人 -
地址 150069黑龍江省哈爾濱市香坊區(qū)哈平路678號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及基于CRISPR?Cas12a的胸膜肺炎放線桿菌快速可視化檢測方法。具體涉及試劑盒，其包含一對針對apxIV的特異性引物對SEQ ID NO：14和15、16和17、18和19、20和21，或26和27（優(yōu)選SEQ ID NO：26和27），以及針對上述引物擴增的產(chǎn)物的序列為SEQ ID NO：3、5、6或8（優(yōu)選SEQ ID NO：8）的gRNA，其用于快速可視化檢測胸膜肺炎放線桿菌。本發(fā)明基于RPA及CRISPR/Cas12a系統(tǒng)的檢測方法，利用Cas12a蛋白，根據(jù)App的特異性基因apxIV設(shè)計特異性重組酶聚合酶擴增（RPA）引物及CRISPR/Cas12a系統(tǒng)探針，以實現(xiàn)RPA特異性靶基因擴增，以及CRISPR/Cas12a系統(tǒng)對報告基因的切割，建立可用于檢測豬胸膜肺炎放線桿菌的方法，并對RPA體系和CRISPR/Cas12a反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化。該方法快速，可視，且特異性好，敏感度高，可用于臨床檢測。