一種自內(nèi)裂解大腸桿菌的裂解酶及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201510197003.3 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN104762285B 公開（公告）日 2017-10-27
申請(qǐng)公布號(hào) CN104762285B 申請(qǐng)公布日 2017-10-27
分類號(hào) C12N9/88(2006.01)I;C12N15/60(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 危宏平;楊航;余軍平 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢樂斯吉生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京市隆安律師事務(wù)所 代理人 武漢菲吉樂科生物科技有限公司;菲吉樂科股份有限公司
地址 430075 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道858號(hào)生物醫(yī)藥園A7展示中心
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種自內(nèi)裂解大腸桿菌的裂解酶及其應(yīng)用。本發(fā)明采用基因拼接的手段，構(gòu)建了一個(gè)全新的裂解酶ClyN，該酶在大腸桿菌中表達(dá)后能導(dǎo)致宿主大腸桿菌的自裂解，釋放出胞內(nèi)表達(dá)的ATP和蛋白質(zhì)。重組蛋白ClyN表達(dá)質(zhì)粒能很好的在大腸桿菌BL21(DE3)中復(fù)制，在IPTG的誘導(dǎo)下表達(dá)15?min后即可觀察到明顯的誘導(dǎo)大腸桿菌自裂解的現(xiàn)象，誘導(dǎo)裂解效率為99.8%。當(dāng)宿主細(xì)菌中表達(dá)有異源增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）時(shí)，EGFP會(huì)在大腸桿菌裂解后釋放到溶液中，且其釋放效率是直接超聲破碎效率的89%。因此，ClyN能用于異源蛋白在大腸桿菌中表達(dá)后的提取與釋放，具有廣大的應(yīng)用前景。