用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標(biāo)準(zhǔn)品及其復(fù)制方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201711343444.5 申請日 -
公開（公告）號 CN108103174A 公開（公告）日 2018-06-01
申請公布號 CN108103174A 申請公布日 2018-06-01
分類號 C12Q1/6869;C12Q1/686;C12Q1/6806 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李同恩;羅璽;師鴻翔;周茜;陳田甜;方亞慧;劉春柳;鄭康;張振宇;趙鵬;王秉孝;朱兵 申請（專利權(quán)）人 中源協(xié)和基因科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 代理人 中源協(xié)和基因科技有限公司;北京中源維康基因科技有限公司
地址 300304 天津市東麗區(qū)空港經(jīng)濟(jì)區(qū)東九道45號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種用于qPCR精確定量Illumina平臺二代測序樣本的定量標(biāo)準(zhǔn)品及其復(fù)制方法，包括以下步驟：(1)以商品化試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品為模板，利用P1、P2接頭引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，接頭引物P1、P2的核苷酸序列為：P1：5"?AATGATACGGCGACCACCGAGA?3"P2：5"?CAAGCAGAAGACGGCATACGAG?3"；(2)反應(yīng)完成后用AMPure XP bead純化，純化完成后，進(jìn)行Qubit定量，Qubit測定濃度后，10倍逐級初步稀釋，稀釋后的樣品進(jìn)行定量實(shí)驗(yàn)，挑選出與商品化標(biāo)準(zhǔn)品濃度最為接近的樣品，作為復(fù)制的標(biāo)準(zhǔn)品1，復(fù)制的標(biāo)準(zhǔn)品得到后，用無酶水進(jìn)行10倍逐級稀釋，得到復(fù)制的標(biāo)準(zhǔn)品第2?6個；(3)復(fù)制的標(biāo)準(zhǔn)品保存于包含緩沖體系和穩(wěn)定劑的溶液中，本發(fā)明的定量準(zhǔn)確，使用方便，相對于商品化試劑盒，大大降低了實(shí)驗(yàn)的成本。