hTERT基因作為內(nèi)參基因在利用qPCR直接檢測(cè)血漿中cfDNA含量中的用途

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201711334588.4 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN107974505A 公開（公告）日 2018-05-01
申請(qǐng)公布號(hào) CN107974505A 申請(qǐng)公布日 2018-05-01
分類號(hào) C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12Q1/6848 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李同恩;羅璽;師鴻翔;鄭康;朱明宇;周茜;劉春柳;趙圓圓;張文會(huì);王紅飛;劉媛;張振宇;趙鵬;王秉孝;朱兵 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 北京中源維康基因科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 代理人 中源協(xié)和基因科技有限公司;北京中源維康基因科技有限公司
地址 300304 天津市東麗區(qū)空港經(jīng)濟(jì)區(qū)東九道45號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種hTERT基因作為內(nèi)參基因在利用qPCR直接檢測(cè)血漿中cfDNA含量中的用途，本發(fā)明通過檢測(cè)DNA中看家基因或穩(wěn)定出現(xiàn)的某些非編碼重復(fù)序列，達(dá)到cfDNA定量的目的。進(jìn)行qPCR之前，血漿用備好的緩沖液和蛋白酶K處理，以去掉蛋白質(zhì)，在反應(yīng)混合物中加入一種用于困難模板擴(kuò)增的特殊聚合酶(velocity polymerase)，該酶每10S可延伸l kb堿基，血漿1：40稀釋后，不需其他處理，直接加入反應(yīng)體系進(jìn)行qPCR測(cè)定血漿cfDNA濃度，通過擴(kuò)增兩種長(zhǎng)度的靶序列對(duì)cfDNA定量。本發(fā)明可以有效的去除掉由于PCR及測(cè)序引入的錯(cuò)誤突變，降低檢測(cè)的背景噪音。對(duì)于0.1％的檢測(cè)限，其靈敏度可以達(dá)到90％以上，特異度高達(dá)99.9％。