一種利用isPLA高通量篩選單域抗體的方法及其應用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110641192.4 申請日 -
公開（公告）號 CN113528569B 公開（公告）日 2022-07-01
申請公布號 CN113528569B 申請公布日 2022-07-01
分類號 C12N15/85（2006.01）I;C12N15/65（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12N15/62（2006.01）I;C12N15/13（2006.01）I;C07K16/18（2006.01）I;C40B30/04（2006.01）I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 馬振毅;劉喆;殷曰苑;嚴飛;周瑞敏 申請（專利權）人 天津醫(yī)科大學
代理機構 天津盛理知識產(chǎn)權代理有限公司 代理人 -
地址 300070天津市和平區(qū)氣象臺路22號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種利用isPLA高通量篩選單域抗體的方法，步驟如下：構建一個含21個隨機氨基酸序列的CDR3區(qū)域的sdAb文庫，序列的C端融合一個3×Flag標簽；共轉(zhuǎn)染細胞，固定細胞進行isPLA；隨后分選、擴增、重組，經(jīng)過多輪篩選和測序后，構建依次包含谷胱甘肽S?轉(zhuǎn)移酶GST、煙草花葉病毒TEV蛋白酶切位點，識別SQSTM1的sdAb序列、假單胞菌外毒素ETA的易位結(jié)構域和3×Flag標簽的重組蛋白，在大腸桿菌中表達，隨后經(jīng)過純化和酶切，即得。本方法能夠從構建的高容量sdAb文庫中篩選到特異性識別不同抗原決定簇的sdAbs，并且成本低、效率高。不涉及動物樣本或雜交瘤的制備。