一種isPLA-Seq的高通量檢測蛋白質(zhì)相互作用的方法和試劑盒及其應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110278036.6 申請日 -
公開（公告）號 CN113125747B 公開（公告）日 2022-06-14
申請公布號 CN113125747B 申請公布日 2022-06-14
分類號 G01N33/68（2006.01）I;C12N15/85（2006.01）I;C12N5/10（2006.01）I 分類 測量；測試;
發(fā)明人 馬振毅;劉喆;周瑞敏;殷曰苑;王國斌 申請（專利權(quán)）人 天津醫(yī)科大學(xué)
代理機(jī)構(gòu) 北京知元同創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 -
地址 300070天津市和平區(qū)氣象臺路22號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了體外篩選或檢測蛋白間相互作用的方法和檢測試劑盒及其應(yīng)用。所述方法包括：1）構(gòu)建含有第一標(biāo)簽的cDNA文庫的第一重組表達(dá)載體；2）構(gòu)建可表達(dá)含有第二標(biāo)簽的待研究蛋白的第二重組表達(dá)載體；3）將第一重組表達(dá)載體和第二重組表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，培養(yǎng)一段時間后將細(xì)胞進(jìn)行固定；4）將步驟3）制備的固定后的細(xì)胞進(jìn)行原位鄰近連接實(shí)驗(yàn)（in situ proximity ligationassay,isPLA）,然后分選isPLA陽性細(xì)胞；5）將步驟4）獲得的isPLA陽性細(xì)胞裂解后作為模板，根據(jù)第一重組表達(dá)載體的外源基因插入位點(diǎn)的上下游序列設(shè)計引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后將PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，依據(jù)序列得出相互作用蛋白的氨基酸序列。