一種高效表達(dá)與制備外分泌型人源AFP的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201410320779.5 申請日 -
公開（公告）號 CN104371017B 公開（公告）日 2018-03-16
申請公布號 CN104371017B 申請公布日 2018-03-16
分類號 C07K14/47;C12N15/81;C07K1/30 分類 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 歐文斌;孟凡國;嚴(yán)子琴;劉麗;胡衛(wèi)江;劉俊 申請（專利權(quán)）人 嘉興博泰生物科技發(fā)展有限公司
代理機(jī)構(gòu) 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司 代理人 嘉興博泰生物科技發(fā)展有限公司;浙江清華長三角研究院
地址 314006 浙江省嘉興市南湖區(qū)亞太路705號創(chuàng)新大廈1109室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種高效表達(dá)與制備外分泌型人源AFP的方法，該方法主要包括如下三個方面的內(nèi)容：(1)利用基因合成技術(shù)合成AFP的DNA序列，再采用基因克隆和分子生物學(xué)方法構(gòu)建酵母重組表達(dá)質(zhì)粒PpICZ α A?AFP，并進(jìn)行質(zhì)粒抽提；(2)使用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)體外誘導(dǎo)表達(dá)分泌型AFP重組蛋白，并通過優(yōu)化表達(dá)時(shí)間、誘導(dǎo)劑添加量等條件得出最佳誘導(dǎo)條件；(3)優(yōu)化硫酸銨分級沉淀,從發(fā)酵液上清中分離純化得到分泌到胞外的AFP重組蛋白，在55％硫酸銨濃度下目的蛋白AFP幾乎全部析出，且純度高達(dá)98.844％；本發(fā)明將純化得到的分泌重組蛋白AFP用臨床檢測電化學(xué)發(fā)光法檢測其生物活性，其值達(dá)3500ng/mL。