一種BCR免疫組庫全長擴增的三代建庫測序方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010603495.2 申請日 -
公開（公告）號 CN111662970A 公開（公告）日 2020-09-15
申請公布號 CN111662970A 申請公布日 2020-09-15
分類號 C12Q1/6869(2018.01)I;C40B50/06(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 方濤 申請（專利權）人 武漢菲沙基因信息有限公司
代理機構 上海精晟知識產權代理有限公司 代理人 武漢菲沙基因信息有限公司
地址 430000湖北省武漢市東湖高新技術開發(fā)區(qū)高新大道666號武漢國家生物產業(yè)基地項目B、C、D區(qū)研發(fā)樓B1棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種BCR免疫組庫全長擴增的三代建庫測序方法，步驟包括：1)根據(jù)BCR一致性序列的恒定區(qū)設計與合成引物；2)通過Oligo dT引物和BCR Template Switching Oligo引物的作用下合成第一鏈cDNA；3)BCR cDNA的全長第一輪和第二輪的擴增；4)BCR全長擴增子片段混樣；5)文庫構建；6)進行三代測序。本發(fā)明通過在BCR恒定區(qū)的保守區(qū)域設計多重引物，覆蓋整個BCR的全長序列。在進行BCR序列擴增時，為進一步提高3’端擴增的有效性，設計了多組半巢式引物，通過半巢式引物的匹配篩選即可獲得覆蓋整個BCR全長的擴增子片段。通過PacBio建庫流程，在擴增子的兩端添加帶有barcode的測序接頭，即可進行PacBio測序，通過拆分與數(shù)據(jù)校正后獲得準確率在99％以上的HiFi Reads。??