一種巢式PCR數(shù)字定量方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201410396994.3 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN104195236A 公開（公告）日 2014-12-10
申請(qǐng)公布號(hào) CN104195236A 申請(qǐng)公布日 2014-12-10
分類號(hào) C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 謝兵 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 樂普（北京）診斷技術(shù)股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京金知睿知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 林俐;殷根娣
地址 102200 北京市昌平區(qū)科技園區(qū)超前路5號(hào)4棟生產(chǎn)樓3層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種巢式數(shù)字PCR定量方法，其特征是改進(jìn)的巢式PCR及樣本10倍稀釋梯度分散至有限單元的數(shù)字PCR方法，包括下列步驟：在每個(gè)反應(yīng)單元中預(yù)先加入礦物油,在礦物油下方加入1-5μL小體積的第一輪PCR混合液，所述混合液包括等體積的2×反應(yīng)液和連續(xù)10倍稀釋梯度的樣本液，在第一退火溫度下使用外側(cè)引物進(jìn)行第一輪擴(kuò)增；隨后在第一輪擴(kuò)增產(chǎn)物中加入10-20倍于第一輪PCR體積的第二輪PCR反應(yīng)液，在第二退火溫度下使用內(nèi)側(cè)引物進(jìn)行第二輪擴(kuò)增；最后檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行計(jì)數(shù)定量。本發(fā)明還提供了用于本發(fā)明的巢式數(shù)字PCR定量方法的基因檢測(cè)試劑盒。