一種巢式PCR數(shù)字定量方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201410396994.3 申請日 -
公開（公告）號 CN104195236B 公開（公告）日 2015-08-19
申請公布號 CN104195236B 申請公布日 2015-08-19
分類號 C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 謝兵 申請（專利權）人 樂普（北京）診斷技術股份有限公司
代理機構 北京金知睿知識產權代理事務所（普通合伙） 代理人 林俐;殷根娣
地址 102200 北京市昌平區(qū)科技園區(qū)超前路5號4棟生產樓3層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種巢式數(shù)字PCR定量方法，其特征是改進的巢式PCR及樣本10倍稀釋梯度分散至有限單元的數(shù)字PCR方法，包括下列步驟：在每個反應單元中預先加入礦物油,在礦物油下方加入1-5μL小體積的第一輪PCR混合液，所述混合液包括等體積的2×反應液和連續(xù)10倍稀釋梯度的樣本液，在第一退火溫度下使用外側引物進行第一輪擴增；隨后在第一輪擴增產物中加入10-20倍于第一輪PCR體積的第二輪PCR反應液，在第二退火溫度下使用內側引物進行第二輪擴增；最后檢測擴增產物，進行計數(shù)定量。本發(fā)明還提供了用于本發(fā)明的巢式數(shù)字PCR定量方法的基因檢測試劑盒。