一種重組載體CAR-CD244-antiPSMA的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810984124.6 申請日 -
公開（公告）號 CN109097401B 公開（公告）日 2021-09-07
申請公布號 CN109097401B 申請公布日 2021-09-07
分類號 C12N15/867;C12N5/10;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 顧雨春;尹樂 申請（專利權）人 北京呈諾醫(yī)學科技有限公司
代理機構 北京衛(wèi)平智業(yè)專利代理事務所（普通合伙） 代理人 謝建玲;郝亮
地址 102600 北京市大興區(qū)經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)科創(chuàng)十三街18號院13號樓3層301
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種重組載體CAR?CD244?antiPSMA的制備方法，包括以下步驟：步驟1、將特異性抗體編碼基因使用末端帶有BfuAI限制性內(nèi)切酶識別位點的引物進行PCR擴增；所述特異性抗體編碼基因序列為PSMA抗體的部分序列，為序列表序列3；步驟2、將步驟1的PCR產(chǎn)物分別進行純化；步驟3、將步驟2純化的PCR產(chǎn)物在BfuAI限制性內(nèi)切酶識別位點進行單酶切，并同時將含有改造的CD244骨架的克隆載體在BfuAI限制性內(nèi)切酶識別位點進行單酶切；步驟4、將酶切后產(chǎn)物進行純化；步驟5、將純化后的產(chǎn)物按抗體片段與含有改造的CD244骨架的克隆載體摩爾比為3:1配比后，使用T4連接酶進行連接、轉(zhuǎn)化、涂板、挑取單克隆提取質(zhì)粒測序；將連接正確的質(zhì)粒，命名為：重組載體CAR?CD244?antiPSMA。