一種利用福爾馬林固定石蠟包埋樣本快速構(gòu)建RRBS測序文庫的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202111060933.6 申請日 -
公開（公告）號 CN113550013A 公開（公告）日 2021-10-26
申請公布號 CN113550013A 申請公布日 2021-10-26
分類號 C40B50/06（2006.01）I 分類 組合技術(shù)〔8〕;
發(fā)明人 谷紅倉;王云飛;車仙榮;陶宛琪;錢飛箭 申請（專利權(quán)）人 杭州圣庭醫(yī)療科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 杭州華鼎知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 魏亮
地址 311113浙江省杭州市余杭區(qū)良渚街道通運(yùn)街362號11幢301室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種利用福爾馬林固定石蠟包埋樣本快速構(gòu)建RRBS測序文庫的方法，屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明包括如下步驟：步驟一，取石蠟包埋的組織樣本，獲得基因組DNA；用末端修飾酶加ddATP修復(fù)；步驟二，采用限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA的CpG島；步驟三，用末端修飾酶對基因組DNA進(jìn)行末端修復(fù)并在3’端加A?Tailing；步驟四，用DNA連接酶進(jìn)行甲基化接頭連接，混合樣本；步驟五，采用亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化非甲基化胞嘧啶；步驟六，甲基化文庫PCR富集；步驟七，切膠回收；本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)福爾馬林浸泡造成的RRBS構(gòu)建FFPE DNA文庫失敗率高的問題，具有廣大的應(yīng)用前景和市場價值。