一種利用血液循環(huán)腫瘤DNA快速構(gòu)建RRBS測序文庫的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202111060927.0 申請日 -
公開（公告）號 CN113604540A 公開（公告）日 2021-11-05
申請公布號 CN113604540A 申請公布日 2021-11-05
分類號 C12Q1/6806（2018.01）I;C12Q1/6886（2018.01）I;C12N15/10（2006.01）I;C40B50/06（2006.01）I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 谷紅倉;王云飛;車仙榮;陶宛琪;錢飛箭 申請（專利權(quán)）人 杭州圣庭醫(yī)療科技有限公司
代理機構(gòu) 杭州華鼎知識產(chǎn)權(quán)代理事務所（普通合伙） 代理人 魏亮
地址 311113浙江省杭州市余杭區(qū)良渚街道通運街362號11幢301室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種利用血液循環(huán)腫瘤DNA快速構(gòu)建RRBS測序文庫的方法，屬于分子生物學領域，構(gòu)建方法包括：步驟一，以血液樣本獲得ctDNA；用末端修飾酶對ctDNA的末端進行加ddATP修復；步驟二，采用限制性內(nèi)切酶消化基因組DNA的CpG島；步驟三，用末端修飾酶對基因組DNA進行末端修復并在3’端加A?Tailing；步驟四，用DNA連接酶對DNA進行甲基化接頭連接；步驟五，采用亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化非甲基化胞嘧啶；步驟六，甲基化文庫PCR富集；步驟七，切膠回收；本方法解決了現(xiàn)有技術利用血液進行RRBS構(gòu)建ctDNA文庫失敗率高的問題，提高接頭和酶切位點結(jié)合的效率，推進了液體活檢技術的發(fā)展。